Az áramlási citometria elve a klinikai laboratóriumi diagnosztikában

click fraud protection

A mennyiségi citometria egy viszonylag új módszer a diszperziós közeg mikrobiológiai vizsgálatára, amelyet speciális berendezések segítségével végeznek el. A citometria statikus és folyékony.

A statikus citometria konfokális mikroszkóppal történik;ezek hiányában a kissé módosított lumineszcens mikroszkópok egyszerű és olcsó képelemző rendszerekkel vannak felszerelve.

Az áramlási citometriát speciális eszközökön - sorter és áramlásos citrométereken végezzük.

A kvantitatív citometria mindkét változata a lehető legszélesebb körben alkalmazható az orvosi és biológiai kutatás gyakorlatában. A használt klinikai anyag és a kísérleti modellek közötti különbség ellenére az általuk megoldott feladatok a tanulmány általános elvei alá tartoznak.

Mi az áramlási citometriás?

áramlási citometriával nevezett technikával tanulmány anyagok a diszperzióban módban Singler részecskék analizálására, amely tartalmazza a diszpergált fázis a vett jelek a fluoreszcencia és fényszórás.

Az áramlási citometriás technikát speciális kísérletek alapján fejlesztettük ki a vizsgált részecskék méretének meghatározása és számuk megszámolása céljából.

instagram viewer

első sejtválogatót jött létre 1965-ben az évben, de mivel az elején a következő évtizedben rendezték termelés mérésére szolgáló eszközök fluoreszcenciaintenzitásokat több hullámhosszon, hogy meghatározzuk több paramétert a vizsgált sejtben.

kutatók Modern áramlási citometriával eszközöket használnak két típusa:

  • nívó fluoreszcencia két( vagy több) hullámhosszon és fényszórásos szögben tíz( az úgynevezett kis szög előreszórás) és kilencven fokkal. Az ilyen eszközök könnyen használhatóak.
  • meglehetősen nehézkes sejtosztályozó képes mérni több mint öt paraméterei a magok vagy a részecskék, valamint rendezni rendelkező sejtek a konkrét paraméterek.

készülék fejlett áramlási citométer annyira összetett és változatos, hogy nehéz olyan általánosítás és rendszerezése, de néhány általános pontot, közös az összes eszköz, továbbra is fennáll:

  • analízishez a citométer bármilyen típusú igényel egy homogén szuszpenziót a sejtek egy bizonyos típusú.
  • A sejtek vagy sejtmaguk számának hiányában nem szabad.
  • Annak érdekében, hogy megakadályozzák a sejtek összeragasztását, a kutatónak teljes körű információval kell rendelkeznie a fényszóródás jellegéről, és rendelkeznie kell táblázatokkal a vonatkozó adatokkal.

minták

Az orvosi és biológiai vizsgálatok során a sejtekből előállított minták: csontvelő

  • ;
  • vér;
  • cerebrospinális folyadék( CSF);Az synovial( ízületi) folyadék
  • ;
  • pleurális folyadék;
  • peritoneális( ascites) folyadék halmozódik fel a hasüregben az ascites kialakulásának ideje alatt;
  • daganat és egészséges szövetek.

Az áramlási citometriás módszer alapelve

A citometriai eljárás alapjául szolgáló elvek rendkívül egyszerűek.

szuszpenziók sejtekből készített pre-fluoreszcens monoklonális antitestekkel vagy fluorokrómok kerül az áramlás a diszperziós közeg, továbbított át az átáramlásos cellán. Hidrodinamikus fókuszálás

sejtszuszpenziót jet áramába a diszperziós közeg vezet az a tény, hogy a vizsgált sejteket vagy azok magok vannak elrendezve egyszeresen és ebben a sorrendben kereszttartóval fókuszált fényt( tipikusan lézer) fényt.

fény fluorokrómok, fókuszált optikai rendszer, amely több, tükröket és lencséket, majd elterjedt az egyes alkatrészeken.

kapott fényjeleket analizáljuk, és a konverziós elektromos impulzusok, majd - az egyes formái számítógépes feldolgozás számára alkalmasak és tárolására a vett információt.

Fluorokromok

Az áramlási citometriás eljárás során a sejtszerkezet meghatározásának megkönnyítése érdekében az alkalmazott diszperziós közeget speciális fluoreszcens festékekkel fluoreszkáljuk.

Az ilyen kezelést követően a vizsgált sejtek képesek fényt fluoreszkálni( light) egy fénysugár hatására.

A festék kiválasztásakor számos kritériumot alkalmaznak:

  • A használt fluorokrómnak a vizsgált DNS-re specifikusnak kell lennie.
  • A festék spektrális tulajdonságainak meg kell felelniük az alkalmazott berendezés képességeinek.
  • Fontos tényező a fluorokróm költsége( nem lehet nagyon magas).
  • A használt festékeknek könnyen használhatónak kell lenniük( stabilitás és jó oldhatóság).

Az egyik legnépszerűbb fluorokróm a propidium-jodid: spektrális jellemzői ideálisan alkalmasak az áramlási citometria elvégzésére.

A propidium-jodid alkalmazásával történő fluoreszcencia aktiválásához a kutatók hagyományos argonlézert használnak( működő hullámhossza 480 nm).A fluoreszkáló rész területe olyan, hogy lehetővé teszi számunkra a fent említett fluorokróm használatát több paraméteres mérések végrehajtásához.

Az áramlási citometriához a következőket is alkalmazzuk:

  • fluoreszcein-izotiocianát;
  • phycoerythrinek( Cy5, Cy7, Texan red);
  • alloficocyanin;
  • Peridinin-Klorofill Protein.

Függetlenül attól, hogy melyik festék részt vesz az eljárásban, annak mennyisége közvetlenül arányos a sejtszerkezet DNS-tartalmával.

Az összes sejtszerkezet minőségi festése érdekében az alkalmazott fluorokróm mennyiségének túlzottnak kell lennie.

A legtöbb DNS-vel érintkező fluorokróm nem képes áthatolni az érintetlen( ép) sejtek membránján. A sejtmembránok permeabilitásának növelése érdekében a vizsgált sejteket felületaktív anyagokkal( detergensekkel) vagy alkohollal kezeljük.

Az

előnyei Az áramlási citometria kétségtelen előnyei tekinthetők:

  • Magas( akár százezer epizód másodpercenként) az analízis sebessége.
  • A sejtpopulációk meghatározása.
  • A sejtek számának hatalmas( legfeljebb 108 eleme egy ml diszperziós közegben) elemzése.
  • Képes meghatározni minden sejt és sejtstruktúra paramétereit( beleértve a ritka is).
  • Nagyfokú objektivitás a lumineszcencia intenzitás mérésében( fluoreszcencia).

Hol kell jelentkezni?

Az áramlási citometria alkalmazásának spektruma szokatlanul széles. A gyártási folyamatot az iparban is használják. Ezt bizonyítani fogjuk, ha tájékoztatást nyújtunk a listák formájában az egyértelműség érdekében.

Az onkológiában

A gyógyszer ezen szakaszában az áramlási citometriát használják:

  • mennyiségi meghatározása intracelluláris struktúrák( DNS);
  • tanulmány a sejtciklus főbb paramétereiről;
  • azon sejtek azonosítása és számlálása, amelyek a sejtciklus különböző periódusaihoz tartoznak;
  • aneuploid klónok kimutatása( kóros sejtek nem standard kromoszómakészletekkel), amelyek jelzik az akut leukémia kialakulását;
  • , amely feltárja az aneuploid klónok proliferatív aktivitását( hajlamot az aktív osztódásra);
  • tumor markerek detektálása;
  • figyeli a veszélyeztetett betegek állapotát;Az
  • értékeli az immunrendszer működését és az immunsejtek funkcionális konzisztenciáját;
  • lymphocyták szubpopulációinak kimutatása( ez a jellemző lehetővé teszi a immunitás állapotának felmérését).

Videó az áramlási citometriával az akut leukémia diagnózisában:

Immunológia

Az áramlási citometriás módszer lehetővé teszi:

  • a vérsejtek immunfenotipizálására( meghatározza a típusát és a funkcionális állapotát);Az
  • létrehozza az immunsejtek fagocitikus aktivitását( ezt jelzi a fluoreszcens festékekkel jelölt baktériumok befogása);Az
  • azonosítja az intracelluláris fehérjéket;Az
  • határozza meg a proliferatív aktivitás mértékét;
  • a sejtciklus szakaszainak vizsgálatára;Az
  • értékeli a citotoxicitás mértékét( protézisek, baktériumok és vírusok megsemmisítését lehetővé tevő védőmechanizmus) intracelluláris szinten. Citológia

Áramlási citometria átfogó adatokat, hogy:

  • pontosabban állítsuk citomorfológiai bármilyen sejt jellemzők( a mérete, a mértékű aszimmetria, közötti arány a sejtmagban és a citoplazmában);Az
  • értékeli a sejtet alkotó enzimek aktivitását;
  • elemzi a sejtciklus szakaszait;Az
  • mérik a fiziológiás intracelluláris paramétereket( pH-szint, sejtmembránpotenciál, szabad ionok koncentrációja).

Hematológia áramlási citometriával lehet Hematológusok:

  • elemzik a vérsejtek alfajai;
  • a retikulocyták és a vérlemezkék számának megadására specifikus markerek segítségével;Az
  • értékeli a maradék( maradék, nem teljesen gyógyult) betegség következményeit;
  • akut leukémia diagnosztizálása;
  • végre egy differenciáldiagnózis reakcióképes lymphocytosis és limfoproliferatív betegségek( betegségek, amelyekben az érintett sejtek, amelyek limfoid jellege);
  • a limfoproliferatív etiológiák betegségeinek diagnosztizálására.

Pharmaceuticals

Áramlási citometria segít farmakológus:

  • meghatározott expressziós szintje( érzékenysége daganatok különböző lokalizációt kezelés gyógyszerek) fehérje markerek;Az
  • mérni tudja a sejteket alkotó enzimek aktivitását;Az
  • foglalkozott a bioaktív anyagok hatásának tanulmányozásával az emberi test sejtjeinek állapotával a sejtciklus bármely szakaszának meghatározására.

mezőgazdaság

eljárás áramlási citometriával széles körben használják a tudósok szakosodott a tenyésztési új növény- és állattenyésztés, mivel lehetővé teszi, hogy:

  • meghatározására ploidia( több azonos kromoszóma készlet a sejtmagban) sejtek;
  • elvégzi a sejtciklus bármely szakaszának elemzését;Az
  • elvégzi a protoplasztok( bakteriális vagy növényi sejtek) tartalmának elemzését, és a beállított paramétereknek megfelelően rendezi azokat.
  • Ossza Meg